Лабораторний моніторинг перебігу інфекції SARS COVID-19

Лабораторний моніторинг перебігу інфекції SARS COVID-19

Новини
25-06-2020

                                                                                            

Особливості коронавірусної інфекції та накопичений досвід боротьби з нею не дозволяють використовувати традиційні підходи до діагностики вірусних інфекцій. У цьому випадку потрібен виважений, комплексний підхід.

Для чого проводити дослідження на антитіла до коронавірусу - ІФА (імуноферментний аналіз)

Механізми імунної відповіді у різних пацієнтів можуть відрізнятися. Щоб отримати повну картину, рекомендують досліджувати кров на антитіла одразу трьох видів. Це може полегшити інтерпретацію отриманого результату. Отож у крові визначають рівень антитіл класу A (IgA), G (IgG) і М (IgM).

Антитіла класів IgM та IgA починають виявлятися в середньому на 4 день від появи симптомів, їх рівень зростає до 14 дня. Антитіла класу IgG починають виявлятись на 0–7 дні, їхня концентрація зростає з 8–по 21 дні, після чого виходить на плато.

У останніх дослідженнях тестування на наявність антитіл було визнано більш чутливим, ніж виявлення вірусної нуклеїнової кислоти, починаючи приблизно з 8-го дня від появи симптомів. Є дані, що концентрація антитіл IgM до SARS-CoV-2 має кореляцію з виявленням РНК вірусу.

Виявлення антитіл методом ІФА буде також актуальним для пізніх стадій зараження після елімінації вірусу, оскільки це дасть змогу визначити наявність протективного імунітету у осіб, що перехворіли, а також моніторити ступінь поширення вірусу та наявність імунітету населення.

Коли потрібно проводити дослідження на коронавірус (ІФА)

Тестування на наявність антитіл може бути доречним у таких умовах:

1) діагностика пацієнтів, які звертаються за медичною допомогою через 7 і більше днів від появи симптомів;

2) контактне відстеження;

3) виявлення безсимптомних носіїв;

4) визначення імунного статусу та ризику зараження;

5) сероепідеміологічні дослідження для визначення масштабів поширення COVID-19.

Про що свідчить виявлення різних типів антитіл

IgA - це той клас антитіл, які з'являються відразу після того, як організм проходить гостру фазу боротьби з SARS-CoV-2. Це означає, що IgА дозволяє достовірно визначити, чи зіткнувся організм з коронавірусною інфекцією і якої сили є імунна відповідь на ранній стадії захворювання (з 4 дня).

Дослідження наявності антитіл IgA до SARS-CoV-2 дасть змогу:

- підтвердити активну фазу перебігу захворювання на COVID-19;

- провести моніторинг гострої фази перебігу   захворювання та оцінити імунну відповідь    організму.

Виявлення антитіл IgA до SARS-CoV-2 рекомендують проводити з 10 дня після ймовірного контакту з особою, у якої підтверджено захворювання на COVID-19.

А от за наявністю і рівнем IgM антитіл в крові можна судити про поточну або нещодавно перенесену інфекцію.

Позитивний результат дослідження IgM антитіл можливий не лише при наявності клінічних ознак інфекції, але і в інкубаційному періоді й у безсимптомних осіб.

Дослідження на антитіла IgM дає змогу:

- судити про те, що, ймовірно, в людини є поточна або недавно перенесена інфекція

- наявність антитіл IgM свідчить про те, що організм на момент проведення дослідження перебуває у процесі боротьби з COVID-19.

Дослідження на рівень антитіл IgM рекомендують робити через 4-5 днів з моменту ймовірного зараження.

Імуноглобуліни G починають вироблятися в організмі через 7-14 днів після появи симптомів захворювання, їх рівень збільшується повільно, але тривалий час може залишатися високим. За наявністю і рівнем IgG антитіл в крові можна робити висновки про факт інфікування в минулому і визначити наявність специфічного імунітету - здатності організму розпізнавати вірус під час повторної зустрічі з ним. Певна частина антитіл є захисними, тобто вони допомагають організму протистояти новому зараженню.

Дослідження на антитіла lgG дає змогу:

- визначити, чи людина вже стикалася з коронавірусною інфекцією;

- визначити, чи наявні антитіла до коронавірусу.

Останнім часом у світі обговорюють можливість масового тестування населення з метою виявлення людей, які вже мають імунітет до нового коронавірусу і яким можна видати так званий Сертифікат або паспорт імунітету. Для України це стає особливо актуальним в період поступового виходу з карантину та повернення співробітників на робочі місця. Тестування на антитіла IgG дозволяє зрозуміти, хто уже має антитіла, які з високою ймовірністю свідчать про наявність імунітету до вірусу.

Також тестування на антитіла дає більш достовірне уявлення про масштаби пандемії. Отож це дослідження може допомогти в ухваленні рішення про можливість повернення людей з карантинного режиму в суспільне життя. Однак все ж поки вірус вивчений недостатньо і не можна достовірно стверджувати про відсутність ймовірності повторного інфікування і носійства.


Чи потрібно робити ПЛР-аналіз після тестування на антитіла?


Так, потрібно. Для остаточного підтвердження чи спростування діагнозу все ж потрібен ПЛР-аналіз. Саме поєднання виявлення антитіл IgM та IgG до SARS-CoV-2 з ПЛР- аналізом може бути найкращим лабораторним показником для діагностики.

Висновки

Використовуючи наявні докази, було розроблено клінічно корисну шкалу діагностичних маркерів для виявлення COVID-19 ( рисунок ). Час перебігу позитивності ПЛР та сероконверсії може відрізнятися у дітей та інших груп, включаючи велику популяцію безсимптомних осіб, які проходять діагностику без активного спостереження. Залишається багато питань, зокрема, як довго триває потенційний імунітет у людей, як безсимптомних, так і з проявами хвороби, які інфіковані SARS-CoV-2.



ІНТЕРПРЕТАЦІЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ТЕСТІВ НА SARS-CoV-2

ПЛР (RealTime SARS-CoV-2)

Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgA)

Anti-SARS-CoV-2  ELISA (IgG)

Рання фаза гострої інфекції (до 10 дня)

+

Пізня фаза гострої інфекції (з 10 дня)

–(+)

+(–)

+/–

Недавня інфекція

+(–)

+

Перенесена інфекція

+/–

+

Сумнівний результат, неспецифічна реакція

+

ХАРАКТЕРИСТИКА СЕРОЛОГІЧНИХ ТЕСТІВ НА SARS-CoV-2

■IgG: висока специфічність 99% через використання домену білка шипа S1 SARS-CoV-2; підходить для ідентифікації осіб, які мали контакт з вірусом деякий час назад

 
■ IgA: підтверджує аналіз контрольних зразків після зараження, підтверджених методом ПЛР; вказує на початок імунної реакції; не рекомендується для скринінгу через обмежену специфічність близько 90% в контрольних групах

Результати досліджень

Клінічні значення

ПЛР

IgA

IgM

IgG

+

-

-

-

Пацієнт може перебувати в періоді серологічного вікна.

+

+/-

+

-

Пацієнт може бути в ранній стадії інфекції.

+

+

+

+

Пацієнт в активній фазі інфекції.

+

+/-

-

+

Пацієнт може бути в пізній стадії або на стадії одужання.

-

+

+

-

Пацієнт може бути в ранній стадії інфекції. Результати ПЛР можуть бути хибно-негативними.

-

-

-

+

Пацієнт був інфікований в минулому та одужав.

-

+/-

+

+

Пацієнт може бути на стадії одужання. Результати ПЛР можуть бути хибно-негативними.

РАЦІОНАЛЬНЕ ВИКОРИСТАННЯ ТЕСТІВ для діагностики SARS CoVID-19 від МЛ «ЕСКУЛАБ»:

 Виявлення методом РНК SARS COVID-19 методом ПЛР (RealTime SARS-CoV-2) для виявлення гострої інфекції з детекцією таргетних генів E, N, RdRp.

■ Серологічні методи – імуноферментний аналіз (ІФА):
– виявлення антитіл Anti-SARS-CoV-2 (IgA) для подальшого моніторингу пацієнтів з гострою інфекцією (підтвердженої позитивної ПЛР).
- виявлення антитіл Anti-SARS COV-2 (IgM)-. IgM синтезуються при первинній імунній відповіді.
- виявлення антитіл Anti-SARS-CoV-2 (IgG) для виявлення минулого контакту зі збудником (від 2 до 4 тижнів після зараження).

■ Антитіла IgG/IgM до SARS COV-2 (експрес- тест). Якщо звертається пацієнт з такими симптомами як: підвищена температура тіла, кашель, закладеність носа, утруднене дихання - лікарі можуть запідозрити COVID-19 . Щоб вирішити, який алгоритм дій застосовувати далі, пацієнту проводять швидкий тест .  Зараз це найшвидший спосіб визначення COVID-19, який проводиться методом якісного виявлення антитіл в зразках крові пацієнта.

Генетичне тестування локусу I/D (rs4343) гену ангіотензин-конвертуючого ферменту ACE, який є рецептором для SARS-COVID-19- Це дослідження дасть змогу: протестувати  локус I/D (rs4343) гена ангіотензин-конвертуючого ферменту ACE і  визначити  генотип та генетично обумовлений рівень експресії білка АСЕ в пацієнта, тобто, виявити підвищенний ризик інфікування SARS COVID-19).

Пакет "Фактори ризику важкого перебігу COVID-19 та інших ГРВІ"  - Для оцінки загального стану організму і виявлення людей з груп ризику по розвитку ускладнень коронавірусної  інфекції  COVID-19.

• Клінічний аналіз крові (з лейкоцитарною формулою)
• Коагулограма
• Аланінамінотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатамінотрансфераза (АСТ)
• Феритин
• Креатинін
• Глюкоза сироватка
• С-реактивний білок
• Холестерин

Посилання: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7194886/pdf/main.pdf

«IgA-Ab response to spike glycoprotein of SARS-CoV-2 in patients with COVID-19: A longitudinal study

Clinica Chimica Acta 507 (2020) 164–166»



Також рекомендуємо